第四节 病毒的血清学检测

  许多血清学技术可用于病毒及其相应抗体的检测

  如：

  1中和试验（最常用，新分离病毒，判断血清型）

  2免疫染色技术

  3免疫沉淀技术

  4免疫转印技术

  5酶联免疫吸附试验（ELISA）等

  病毒中和试验：

  1针对病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感染性。

  2中和试验具有很强的特异性，是检测病毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方法，也可用于检测病毒感染动物血清中的抗体。

  血凝抑制试验（特异性）：

  1具有血凝活性病毒的抗体可阻断病毒与红细胞的结合。

  2利用血凝抑制试验可检测和鉴定具有血凝特性的病毒。

  3将特异性抗体与病毒作用，然后观察血凝抑制现象。

  4该法敏感、简单、费用低、操作简便也用于检测动物血清中血凝抑制抗体。

  病毒蛋白的检测：

  1病毒抗体可用于检测感染细胞或组织中的病毒蛋白。

  2采用免疫染色技术如免疫荧光抗体技术、免疫酶染色技术，有直接免疫染色和间接免疫染色两种方法。

  酶联免疫吸附试验（ELISA）（临床实验应用最广泛）

  1酶联免疫吸附试验可用于样本中病毒检测和动物血清中病毒特异性抗体的检测。

  2检测病毒抗原可采用夹心法和双夹心法。

  3检测抗体可采用间接法。

  病毒核酸的检测

  病毒核酸检测是指利用一些分子生物学技术检测病毒核酸而确证样本中病毒的存在

  1基因组电泳分析

  2核酸杂交

  3聚合酶链式反应（pcR）

  4酶切图谱分析

  5dNA 芯片技术等

  病毒的鉴定依据：

  病毒的初步鉴定依据：

  （1）动物感染范围及潜伏期

  （2）对鸡胚的敏感性、细胞形态变化类型

  （3）病毒干扰现象、血凝性质、红细胞吸附。

  （4）理化性质：

  1病毒核酸类型测定

  2病毒大小形态

  3病毒对乙醚敏感试验

  4病毒耐酸试验

  病毒的最后鉴定依据：

  主要是血清学方法和分子生物学方法

  血清学方法：

  1中和试验

  2补体结合试验

  3血凝抑制试验等

  补充

  ·元体、始体和包涵体的比较

  元体

  形态:个体形态

  大小:小而致密

  细胞壁:有

  发育阶段:无繁殖能力的成熟衣原体

  感染:高度传染性

  染色:姬姆萨 紫 马基维洛 红

  始体

  形态:个体形态

  大小:大而疏松

  细胞壁:无

  发育阶段:二等分裂繁殖

  感染:无感染性

  染色:姬姆萨 蓝 马基维洛 蓝

  包涵体

  形态:集团形态

  发育阶段:子代元体和裂殖的始体

  染色:姬姆萨 深紫 G?

  大肠杆菌

  （1）形态及染色特性

  1G- 菌无芽孢的直杆菌，大小 0.4—0.7x2—3um，两端钝圆，散在或成对碱性染料对本菌有良好着色性，菌体两端偶尔略深染

  2鞭毛。大多数菌株以周生鞭毛运动

  3菌毛。一般均有 1 型菌毛，少数菌株兼具性菌毛，多数对人和动物致病菌株还常有与毒力相关的特殊菌毛。

  4荚膜。除少数菌株外，通常无可见荚膜，但常有微荚膜

  （2）培养特征

  1呼吸类型：本菌为兼性厌氧菌

  2营养条件：在普通培养基上生长良好

  3生长温度：最适生长温度为 37c

  4 酸碱度 ：最适生长 ph 为 7.2—7.4

  5生长现象

  大肠杆菌的生长现象

  在肉汤中:S 型菌株呈均匀混浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。

  在营养琼脂上:形成圆形凸起，光滑，湿润，半透明，灰白色菌落，直径约 2—3mm。

  麦康凯琼脂:形成红色菌落

  伊红美蓝琼脂(重要）:产生黑色带金属闪光的菌落。（对比:沙门氏菌无色）

  绵羊血平板:一些致病性菌株呈β溶血。